بهینه سازی تولید آنزیم استرپتوکیناز نوترکیب در باکتری اشریشا کلی

Improvement of recombinant streptokinase production in E.coli


چاپ صفحه
پژوهان
صفحه نخست سامانه
چکیده مقاله
چکیده مقاله
نویسندگان
نویسندگان
دانلود مقاله
دانلود مقاله
علوم پزشکی اراک
علوم پزشکی اراک

نویسندگان: حمید ابطحی

کلمات کلیدی:

نشریه: مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراک, 4,,97 - 103,

اطلاعات کلی مقاله
hide/show

کد مقاله 1826
عنوان فارسی مقاله بهینه سازی تولید آنزیم استرپتوکیناز نوترکیب در باکتری اشریشا کلی
عنوان لاتین مقاله Improvement of recombinant streptokinase production in E.coli
نوع مقاله بر حسب نگارش پژوهشی اصیل
مقاله برحسب نمایه isc
IF
عنوان نشریه مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراک
نوع نشریه علمی پژوهشی
شماره نشریه 4
دوره
صفحه شروع و پایان در نشریه 97 - 103
سال انتشار/ ارائه شمسی
سال انتشار/ارائه میلادی
آدرس لینک مقاله/ همایش در شبکه اینترنت
ISSN
DOI
آدرس علمی (Affiliation) نویسنده متقاضی

چکیده مقاله
hide/show

عنوان متن
چکیده انگلیسیAbstract Background: Streptokinase is one of the antigenic proteins secreted by streptococcus pyogenes. This protein has an important role in bacterial pathogenesis. The aim of this study was to produce recombinant forms of this enzyme so that the product would change in accordance with changes in the media. Materials and Methods: In this experimental study, we amplified the streptokinase gene by polymerase chain reaction (PCR) method. After extraction, it was sub-cloned to prokaryotic expression vector pET32a. pET32a-Ska was transferred to E.coli BL21-DE3-plySs strain. Protein production was induced by IPTG and optimization of culture media and OD of bacteria. The recombinant protein was extracted by Ni-NTA and its concentration was measured by Bradford assay. Western- Blot analysis was used to verify the recombinant protein. Results: The nucleotide sequence of the amplified gene was the same as streptokinase gene of the streptococcus pyogenes. The production of recombinant streptokinase by induction of plasmid pET32a-Ska was done by IPTG. The recombinant streptokinase had the same antigenic properties as natural streptokinase. The largest amount of recombinant protein was produced in bacteria concentrations with OD = 0.8. Also, the production of the recombinant protein was higher in media with no glucose. Conclusion: Changes in culture media can increase the production of recombinant proteins in host bacteria. The presence of nutrients, such as glucose, alone not only can not increase the amount of production but it might even decrease it. Keywords: Gene Expression, Group A Streptococcus, Streptokinase
چکیدهزمینه و هدف: استرپتوکیناز از جمله پروتئین های ترشحی استرپتوکک پیوژن است. این پروتئین در بیماریزایی باکتری نقش مهمی دارد. در این تحقیق سعی بر تولید بالای این آنزیم به شکل نو‌ ترکیب بوده به‌طوری‌که محصول با تغییر ترکیب محیط کشت و تعداد باکتری القاء شده افزایش یابد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، با استفاده ازروش PCR، ژن استرپتوکیناز از استرپتوکوک پیوژن تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن در ناقل پلاسمیدی pET32a جهت بیان کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pET32a -Ska وارد باکتری اشریشیاکلی سویه BL21- DE3-plySs شد. تولید پروتئین با القاء توسط IPTG و بهینه سازی شرایط محیط کشت و تعداد باکتری‌ها صورت گرفت. پروتئین نوترکیب با استفاده از کیت Ni-NTA خالص و میزان پروتئین با استفاده از روش برادفورد اندازه‌گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام شد. یافته ها: ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده با ژن استرپتوکیناز باکتری استرپتوکوک پیوژن یکسان بود. تولید پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز با القاء پلاسمید pET32a -Ska توسطIPTG انجام گردید. پروتئین تولید شده از نظر آنتی ژنیسیته با فرم طبیعی یکسان بود. بیشترین مقدار پروتئین تولید شده در غلظت باکتری با جذب نوری 8/0 بود. در محیط فاقد گلوکز نسبت به محیط‌های گلوکز دار پروتئین بیشتری تولید شد. نتیجه گیری: تغییر شرایط محیط کشت می‌تواند باعث افزایش میزان تولید پروتئین‌های نوترکیب در باکتری میزبان گردد. وجود برخی عوامل غذایی از جمله گلوکز به تنهایی باعث افزایش محصول نمی شود بلکه امکان دارد کاهش محصول را نیز در پی داشته باشد. واژه‌های کلیدی: استرپتوکک گروه A، استرپتوکیناز، بیان ژن،
کلمات کلیدی
نام فایل عنوان پیوست تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود

نویسندگان
hide/show

نویسنده نفر چندم مقاله
حمید ابطحیاول

لینک دانلود مقاله
hide/show

نام فایل عنوان پیوست تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
article A-10-33-6.pdfمتن مقاله1390/11/19227991دانلود