بررسی خواص آنتی ژنیک پروتئین نو ترکیب هیالورونیداز A استرپتوکوک پیوژنز بیان شده در باکتری اشریشیا کلی

Antigenic characteristics of recombinant hyaluronidase A of Streptococcus pyogenes expressed in E. coli


چاپ صفحه
پژوهان
صفحه نخست سامانه
چکیده مقاله
چکیده مقاله
نویسندگان
نویسندگان
دانلود مقاله
دانلود مقاله
علوم پزشکی اراک
علوم پزشکی اراک

نویسندگان: حمید ابطحی , مسعوده کریمی

کلمات کلیدی:

نشریه: مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراک, 2,,72 - 80,

اطلاعات کلی مقاله
hide/show

کد مقاله 1698
عنوان فارسی مقاله بررسی خواص آنتی ژنیک پروتئین نو ترکیب هیالورونیداز A استرپتوکوک پیوژنز بیان شده در باکتری اشریشیا کلی
عنوان لاتین مقاله Antigenic characteristics of recombinant hyaluronidase A of Streptococcus pyogenes expressed in E. coli
نوع مقاله بر حسب نگارش پژوهشی اصیل
مقاله برحسب نمایه isc
IF
عنوان نشریه مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراک
نوع نشریه علمی پژوهشی
شماره نشریه 2
دوره
صفحه شروع و پایان در نشریه 72 - 80
سال انتشار/ ارائه شمسی
سال انتشار/ارائه میلادی
آدرس لینک مقاله/ همایش در شبکه اینترنت
ISSN
DOI
آدرس علمی (Affiliation) نویسنده متقاضی

چکیده مقاله
hide/show

عنوان متن
چکیده انگلیسیAbstract Background: Hyaluronidase A is an antigenic protein that is secreted by Streptococcus pyogenes. Nowadays, streptococcal infections are diagnosed by tracking down anti-hyaluronidase A antibodies. In this study, the attempt was made to generate recombinant hyaluronidase A in E. coli. Materials and Methods: In this experimental study, through designing specific primers and polymerase chain reaction (PCR), hyaluronidase A gene was amplified and after purification, it was sub-cloned in plasmid expression vector pET32a. Then pET32a-hylA was transferred to E. coli BL21- DE3-plySs. Protein generation induced by IPTG. The recombinant protein was purified by Ni-NTA kit and its concentration was assayed by Bradford method. Western-Blot analysis was run for verifying the recombinant hyaluronidase A. Results: The nucleotide sequencing of the gene amplified by PCR was the same as hyaluronidase A gene from Streptococcus pyogenes. Production of the recombinant hyaluronidase A via induction by pET32a-hylA plasmid was done through IPTG. The expressed protein was purified by affinity chromatography by Ni-NTA resin. The concentration of purified protein was 500μg/ml. analysis using a mouse anti-hyaluronidase A serum was reacted with the generated protein using Western-Blot analysis. Conclusion: Recombinant HylA protein can be generated in E.coli and the resulting protein maintains its antigenic properties desirably. Keywords: E. Coli, Gene Expression, Hyaluronidase A Gene, Streptococcus Pyogenes
چکیدهزمینه و هدف: هیالورونیداز A از جمله پروتئین‎های ترشحی استرپتوکوک پیوژن بوده که دارای قدرت آنتی ژنیک می‎باشد. امروزه با ردیابی آنتی بادی‎های ضد این پروتئین روند عفونت ناشی از این باکتری پی‎گیری می‎شود. در این تحقیق سعی گردیده تا تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A در باکتری اشریشیا کلی انجام گیرد. مواد و روش ها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاصی و استفاده از روش PCR، ژن هیالورونیداز A از استرپتوکوک پیوژن تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن فوق در ناقل پلاسمیدی pET32a جهت بیان کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pET32a -hylA وارد باکتری اشریشیا کلی سویه BL21- DE3-plySs شد. تولید پروتئین با القاء توسط IPTG صورت گرفت. پروتئین نوترکیب با استفاده از کیت Ni-NTA خالص و میزان پروتئین با استفاده از روش برادفورد اندازه گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام شد. یافته ها: ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط روش PCR با ژن هیالورونیداز A استرپتوکوک پیوژن یکسان بود. تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A با القاء پلاسمید pET32a -hylA توسطIPTG انجام گردید. تخلیص پروتئین با روش کروماتوگرافی تمایلی و با استفاده از کیت Ni-NTA صورت گرفت. میزان پروتئین خالص شده برابر 500 میکروگرم در میلی لیتر به دست آمد. سرم موش واجد آنتی هیالورونیداز A در روش وسترن بلات با پروتئین تولید شده واکنش داد. نتیجه گیری: تولید پروتئین نوترکیب هیالورونیداز A در میزبان اشریشیا کلی نیز امکان پذیر است. پروتئین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ می‎کند. واژه‌های کلیدی: : استرپوکوک پیوژن، اشریشیا کلی، بیان ژن، ژن هیالورونیداز A،
کلمات کلیدی
نام فایل عنوان پیوست تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود

نویسندگان
hide/show

نویسنده نفر چندم مقاله
حمید ابطحیدوم
مسعوده کریمیچهارم

لینک دانلود مقاله
hide/show

نام فایل عنوان پیوست تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
1241m.pdfمتن مقاله1391/03/04383612دانلود